HPLC y LC-MS en péptidos: qué mide cada técnica
Actualizado: 8 de octubre de 2026
La HPLC separa los componentes de una muestra y mide cuánto hay de cada uno. La LC-MS añade un espectrómetro de masas que dice qué es cada componente. Se usan juntas porque responden a preguntas distintas.
HPLC en fase reversa
Para péptidos se usa casi siempre una columna C18 y un gradiente de agua y acetonitrilo con un modificador ácido (TFA o ácido fórmico). El enlace peptídico absorbe luz UV a 214–220 nm, así que el detector registra una señal en función del tiempo de retención.
La pureza se calcula como el área del pico principal dividida entre la suma de todas las áreas.
Límites de la HPLC
- Una impureza que sale al mismo tiempo que el péptido (coelución) queda oculta bajo el pico principal.
- No ve lo que no absorbe UV, como sales, agua o ciertos contraiones.
- El resultado depende del método: gradiente, longitud de onda y forma de integrar.
- No identifica la molécula: dos péptidos distintos pueden dar un pico limpio.
LC-MS: identidad por masa
Tras la columna, el eluyente se ioniza (normalmente por electrospray) y se mide la relación masa/carga. Los péptidos aparecen con varias cargas ([M+nH]n+); a partir de ellas se calcula la masa molecular y se compara con la teórica. También delata impurezas con masa distinta, como secuencias incompletas u oxidaciones (+16 Da en metionina).
Qué combinación mirar
HPLC para la pureza, MS para la identidad y, si importa la cantidad real de péptido por vial, el contenido neto. Un informe que solo muestra un porcentaje sin cromatograma ni masa es el que menos información da.